幻灯二

解酪氨酸链霉菌SHMCCD58897=DSM42170-变异链霉菌SHMCCD58149-白色葡萄球菌SHMCCD52000

Phusion DNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性,能够有效校正错误,生成平末端产物

在分子生物学领域,DNA聚合酶是PCR技术的核心工具,而Pfu DNA Polymerase因其卓越的高保真性脱颖而出,成为精准基因扩增的首选酶。 Pfu DNA Polymerase是从嗜热菌Pyrococcus furiosus中分离纯化而来的一种耐热DNA聚合酶。与常见的Taq DNA聚合酶相比,Pfu酶最大的优势在于其具有强大的3'到5'外切酶活性,这种活性赋予了Pfu酶校正功能,使其在DNA合成过程中能够及时纠正错误配对的碱基,从而显著提高DNA扩增的准确性。研究表明,Pfu酶的保真度是Taq酶的约7倍,这意味着在扩增长片段DNA或需要高准确性的基因克隆实验中,Pfu酶能够更有效地避免突变的产生。 Pfu DNA Polymerase的耐热性也使其能够适应PCR反应中的高温变性步骤,保证在每个循环中都能稳定地合成DNA。这种耐热性与高保真性相结合,使得Pfu酶在长片段DNA扩增中表现出色。由于其校正功能减少了错误碱基的累积,Pfu酶能够更有效地合成较长的DNA片段,而不会因突变导致扩增失败。

其中,750 bp条带的浓度最高,约为20 ng/μL,其余条带浓度约为10 ng/μL。

磁珠法质粒小量抽提试剂盒是一种基于磁性纳米技术的核酸纯化工具,结合了经典的SDS碱裂解法和磁珠吸附技术,能够从大肠杆菌中快速、高效地提取高质量的质粒DNA。工作原理该试剂盒利用磁珠表面修饰的官能团,在高盐条件下特异性吸附质粒DNA,而杂质如蛋白质、盐离子等则通过洗涤液被去除。当条件改变时,质粒DNA从磁珠表面洗脱下来,从而实现快速分离和纯化。产品特点高效提取:从2 mL过夜培养的菌液(OD600 = 2.0)中可获得超过15 μg的高拷贝质粒DNA。操作简便:无需多次离心,整个提取过程可在1小时内完成,适合高通量操作。纯度高:提取的质粒纯度高,OD260/OD280比值一般为1.8-1.9,OD260/OD230比值大于2.0,可直接用于下游实验。自动化兼容:可与自动化核酸提取仪配合使用,实现完全自动化操作。 应用场景提取的质粒DNA可用于多种下游应用,包括酶切、测序、文库筛选、连接和转化等分子生物学实验。使用方法菌液处理:取适量菌液离心,弃上清后用裂解液悬浮细菌沉淀。裂解与吸附:加入裂解液和中和液,裂解细胞后加入磁珠,吸附质粒DNA。

Tris、硼酸和 EDTA:维持电泳过程中的缓冲体系,确保电泳条件的稳定。

Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)是一种广泛应用于核酸电泳的高浓度缓冲液,特别适用于DNA和RNA的聚丙烯酰胺凝胶电泳。它由三羟甲基氨基甲烷(Tris)、硼酸和乙二胺四乙酸(EDTA)组成,能够为核酸电泳提供稳定的pH环境和良好的导电性。产品特性成分:主要由450 mM Tris-硼酸和10 mM EDTA组成。工作液浓度:稀释5倍后得到的0.5×TBE工作液含有45 mM Tris-硼酸和1 mM EDTA,pH值约为8.0。缓冲能力强:适合较长时间电泳,能够维持稳定的pH值,不易出现pH波动。高分辨率:特别适用于分离小于1 kb的DNA片段,能够提供清晰的条带。稳定性高:室温保存,有效期长达12个月。使用方法稀释:将5×TBE缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释5倍,制备0.5×工作液。电泳操作:将稀释后的0.5×TBE缓冲液加入电泳槽中,确保缓冲液完全覆盖凝胶。加样后开始电泳,电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的核酸染料(如EB或Goldview)染色。在紫外灯下观察核酸条带。

SYBR多次冻融实验中表现出良好的稳定性,即使经过20次冻融,其扩增性能与对照组相比无显著差异

Gel-Red是一种高灵敏度、低毒性的荧光核酸染料,旨在替代传统的溴化乙锭(EB)。它具有与EB相同的光谱特性,能够在不改变现有成像系统的情况下直接替换EB。产品特性安全性高:Gel-Red是一种油性大分子(分子量>1000),难以穿透细胞膜,显著降低了细胞毒性和致突变性。灵敏度高:检测灵敏度比EB高8-10倍,尤其对小分子量DNA的检测更为灵敏。稳定性好:室温下稳定,可耐受微波加热,光稳定性强,操作无需避光。适用范围广:适用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳,可用于dsDNA、ssDNA和RNA的染色。使用方法胶染法(前染法):制备琼脂糖凝胶时,按1:10000的比例加入Gel-Red(例如,50 mL凝胶溶液中加入5 µL 10000×Gel-Red),混匀后倒胶。按常规方法进行电泳。泡染法(后染法):电泳后,将凝胶放入染色液中(用0.1 M NaCl溶液将Gel-Red稀释3300倍),室温振荡染色30分钟。染色液可重复使用3次,4°C或室温避光保存1周。注意事项Gel-Red对玻璃和非聚丙烯材料有亲和力,建议使用聚丙烯容器。

热敏UDG在分子诊断和PCR实验中表现出色,尤其适用于需要严格控制污染的实验环境

Tn5转座酶是一种能够高效切割并插入DNA的酶,广泛应用于基因组编辑和高通量测序文库构建。它通过识别特定的DNA序列并将其插入到目标DNA中,实现基因组的“跳跃”和重组。 工作原理 Tn5转座酶的工作原理包括以下几个步骤: 复合物形成:两个Tn5转座酶分子结合到供体DNA的转座子的ME序列,形成复合物。 切割与插入:在Mg²⁺存在的情况下,Tn5转座酶切割供体DNA,并将其插入到靶DNA中,形成转座后的DNA序列。 结果:切割形成的9bp粘性末端可通过DNA聚合酶和连接酶填补,最终形成9bp正向重复序列。 应用场景 NGS文库构建:Tn5转座酶能够将DNA片段化并直接连接测序接头,简化了传统的文库构建步骤,显著提高了建库效率。 单细胞测序:通过LIANTI技术,Tn5转座酶可用于单细胞DNA建库,实现微量DNA的高效扩增。 ATAC-seq:用于研究染色质可及性,通过将DNA序列插入开放的染色质区域,检测全基因组范围内的染色质开放程度。 CUT&Tag:结合Protein A/G,Tn5转座酶可用于切割靶蛋白结合的染色质区域,并直接插入测序接头,用于研究蛋白质-DNA相互作用。

dNTP Mix是一种由 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 组成的等摩尔混合溶液

在分子生物学和生物化学研究中,DNA的完整性和准确性对于实验的成功至关重要。Uracil-DNA Glycosylase (UDG),特别是来自大肠杆菌(E. coli)的UDG,是一种能够特异性识别并修复DNA中尿嘧啶(U)的酶。UDG (5U/µl)以其高效的修复能力和精准的特异性,成为了许多实验中不可或缺的工具。 UDG的作用机制 UDG是一种DNA修复酶,能够特异性识别DNA中的尿嘧啶(U),并将其从DNA链中移除。这种酶的作用机制基于其对尿嘧啶的高亲和力。在DNA合成过程中,尿嘧啶可能会由于脱氨反应或其他化学修饰而意外掺入DNA链中。UDG通过识别这些尿嘧啶,并将其从DNA链中切除,从而防止错误碱基的积累。这种修复过程是维持DNA完整性和基因组稳定性的重要机制。 UDG在实验中的应用 PCR反应中的防污染:在PCR实验中,UDG常用于防止引物二聚体的形成和非特异性扩增。通过在PCR反应前加入UDG,可以将引物中的尿嘧啶降解,从而避免引物在反应前的非特异性结合。这种方法被称为“热启动PCR”,能够显著提高PCR反应的特异性和灵敏度。

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