棒形孢拟盘多毛孢SHMCCD66080-波罗的海红小梨形菌-马克思克鲁维酵母SHMCCD53750
在特定的缓冲液条件下,核酸会吸附到磁珠表面,而杂质(如蛋白质、引物、dNTP等)则被洗去。
在分子生物学和生物化学实验中,反应缓冲液(Reaction Buffer)和ATP-Mg复合物是许多酶促反应不可或缺的组成部分。它们为酶的活性提供了理想的环境和必要的能量,确保实验反应的顺利进行。 Reaction Buffer:维持反应环境的“稳定器” 反应缓冲液是一种精心配制的溶液,用于维持酶促反应中的pH值、离子强度和缓冲能力。它通常包含以下几种关键成分: 缓冲剂:如Tris-HCl或Hepes,用于维持反应体系的pH值稳定,防止酸碱变化对酶活性的影响。 离子:如Mg²⁺、K⁺等,这些离子对许多酶的活性至关重要。例如,Mg²⁺是许多酶(如DNA聚合酶、激酶等)的必需辅因子。 还原剂:如DTT(二硫苏糖醇)或β-巯基乙醇,用于防止酶的活性位点被氧化。 稳定剂:如甘油或BSA(牛血清白蛋白),用于提高酶的稳定性和活性。 反应缓冲液的成分和浓度根据不同的酶和反应需求进行优化,以确保酶在最佳条件下工作。 ATP-Mg:提供能量的“动力源” ATP(腺苷三磷酸)是细胞内主要的能量货币,许多酶促反应需要ATP提供能量。
这种特性使得EB在低浓度下(如10 µg/ml)染色后无需脱色处理,即可在紫外光下清晰观察到核酸条带
在分子生物学实验中,DNA合成是许多关键技术的核心,而dNTP Set Solution(脱氧核糖核苷三磷酸溶液套装)则是实现精准DNA合成的必备工具。dNTP Set Solution包含四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dCTP、dTTP、dGTP),每种浓度均为100 mM,为各种需要DNA合成的实验提供了强大支持。 DNA合成是生命科学中最基本的生物化学过程之一,无论是PCR扩增、基因克隆还是DNA测序,都离不开dNTPs的参与。dNTP Set Solution中的四种脱氧核苷三磷酸是DNA合成的基本单元,它们在DNA聚合酶的作用下,按照碱基互补配对原则嵌入到新合成的DNA链中。每种dNTP的高浓度(100 mM)设计确保了在反应过程中有足够的原料供应,从而提高反应的效率和灵敏度。 dNTP Set Solution的高纯度和高浓度特性使其在多种实验中表现出色。例如,在PCR反应中,准确的dNTP浓度对于反应的特异性和准确性至关重要。dNTP Set Solution能够确保四种dNTP的比例一致,避免因某一种dNTP过量或不足而导致的扩增偏差。
这种酶的特异性切割能力使其在RNA序列分析中具有极高的应用价值。
MOPS电泳缓冲粉剂(1×)是一种专为核酸电泳设计的缓冲液,广泛应用于RNA和DNA的琼脂糖凝胶电泳实验中。MOPS(3-吗啉丙磺酸)是一种两性离子缓冲剂,具有良好的缓冲能力和稳定性,特别适用于中性pH条件下的核酸分离。产品特性成分:主要由MOPS、乙酸钠和EDTA组成。缓冲范围:pKa值为7.2,有效缓冲范围为pH 6.5-7.9。稳定性高:室温保存,有效期长达1年。即用型设计:粉剂形式,使用时只需用去离子水或双蒸水溶解。使用方法配制1×工作液:取一包MOPS电泳缓冲粉剂,倒入洁净的烧杯中。加入约800 mL去离子水或双蒸水,搅拌溶解。定容至1000 mL,混匀后即可使用。电泳操作:将配制好的1×MOPS缓冲液加入电泳槽中,确保缓冲液完全覆盖凝胶。加样后开始电泳,电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结后,使用合适的核酸染料(如EB或Goldview)染色。在紫外灯下观察核酸条带。保存与注意事项保存条件:室温避光保存,未开封的产品有效期为1年。
操作简单:无需脱色或冲洗,可直接使用紫外凝胶透射仪观察。
在分子生物学和生物技术领域,末端脱氧核糖核酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)是一种极为重要的酶,以其独特的功能在DNA末端修饰和标记中发挥着关键作用。TdT能够将脱氧核苷酸(dNTPs)添加到DNA的3'末端,这一特性使其成为DNA研究中的“艺术家”。 末端脱氧核糖核酸转移酶的特性 末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)是一种依赖于DNA末端的酶,能够将脱氧核苷酸(dNTPs)添加到DNA链的3'末端。与大多数DNA聚合酶不同,TdT不需要模板来指导核苷酸的添加,这使得它能够在DNA末端添加任意序列的核苷酸。TdT的活性不依赖于Mg²⁺离子,而是需要Co²⁺或Mn²⁺离子来激活。 广泛的应用 TdT在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在DNA末端标记中,TdT被用于添加放射性或荧光标记的核苷酸,从而生成用于杂交实验的标记探针。在DNA测序中,TdT可以用于添加特定的核苷酸序列,帮助确定DNA的末端结构。此外,TdT还被用于DNA片段的连接和修复,通过在DNA末端添加特定的核苷酸序列,促进DNA片段之间的连接。
其中,750 bp条带的浓度通常较高(约100 ng/5 µL),便于观察和作为参考。
T7 Endonuclease I(T7EI)是一种来源于T7噬菌体的核酸内切酶,能够特异性识别并切割DNA中的错配碱基对、十字型结构DNA、Holliday结构或交叉DNA以及异源双链DNA。这种酶在基因编辑领域,尤其是CRISPR-Cas9技术中,被广泛用于检测基因突变和编辑效率。 功能与特性 错配识别:T7EI能够识别DNA中的不完全配对碱基对,并在错配位点的5'端切割第一、第二或第三个磷酸二酯键。 高特异性:该酶对特定DNA结构具有高度特异性,能够有效区分野生型和突变型DNA。 应用广泛:除了用于基因编辑效果的检测,T7EI还可用于分解四方向交叉DNA、检测或切割异源双链DNA、随机切割线性DNA进行shot-gun克隆。 在CRISPR基因编辑中的应用 在CRISPR-Cas9基因编辑中,T7EI常用于检测目标基因是否成功引入突变。具体步骤如下: PCR扩增:分别以野生型和突变型DNA为模板,扩增包含突变位点的DNA片段。 变性与退火:将PCR产物变性后退火,形成异源双链DNA。 酶切反应:加入T7EI,在37℃下反应15-30分钟,通过琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。
这一过程对于维持基因组的稳定性和细胞的正常功能至关重要。
2×TBE-Urea 上样缓冲液是一种专为变性核酸电泳设计的试剂,能够有效解除核酸的二级结构,使其保持单链状态,从而实现更清晰的电泳分离效果。组成成分该缓冲液的主要成分包括:尿素(Urea):用于解除核酸的二级结构,保持其单链构型。 溴酚蓝(Bromophenol Blue) 和 二甲苯青(Xylene Cyanol FF):作为示踪染料,用于观察电泳的进程。Tris、硼酸和 EDTA:维持电泳过程中的缓冲体系,确保电泳条件的稳定。聚蔗糖(Ficoll):增加样品密度,帮助样品沉入凝胶孔中。使用方法 样品处理:将 2×TBE-Urea 上样缓冲液与待测核酸样品按 1:1 比例混合,70℃加热 3-5 分钟,使核酸充分变性。上样与电泳:处理后的样品可直接加入变性聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中,进行电泳。应用场景2×TBE-Urea 上样缓冲液主要用于单链 DNA(ssDNA)和 RNA 的变性凝胶电泳,广泛应用于基因分型检测(如 SSR 标记、AFLP、RFLP 等)。它不适用于非变性凝胶电泳或蛋白电泳。储存条件该缓冲液应冷冻保存(-20℃),以保证其稳定性和有效性。
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